Determinació quantitativa de proteïnes

Procediment

Realització de patrons

Les mesures exactes estan en l'apartat «Càlculs per fer les dissolucions patró»

S'etiqueten tres tubs d'assaig amb els noms de les mostres.
Es dissolen les mostres de llet a 1:50.
- Es pipeteja 5 ml de PBS i s'aboca en cada un dels tubs d'assaig.
- En cada tub de mostra de llet s'aboca 1mL de la mostra corresponent.
Es dissol la mostra de clara d'ou a 1:125.
- Es pipeteja 12,5mL de PBS i s'aboca en el tub d'assaig.
- Introduir la mostra en un Eppendorf.
- Es pipeteja 100µL de la mostra i s'aboca en el tub d'assaig.

S'etiqueta les cubetes depenent del contingut que s'abocara (patró, PBS o mostra).
Es pipeteja 20 µL de la dissolució i s'aboca en la cubeta corresponent.
Es pipeteja 1mL de Bradford i s'aboca en la cubeta.
Tapa amb para-film les cubetes i deixar que s'incubi durant 10' a temperatura ambiental.

Endollar a la corrent i encendre l'equip.
Púlsar el boto «PROTEÏNA»
Púlsar el boto «SELECT» per escollir el tipus d'assaig, seleccionar «BRADFORD» i pressionar «ENTER».
En la pantalla surt «VOLS EXTREURE LA LECTURA DE FONS? » polsar «NO» i pressionar «ENTER».
En la pantalla surt «VOLS FER UNA NOVA CORBA ESTÀNDARD? » polsar «SI» i pressionar «ENTER».

Selecciona 1 per-programar el mètode pel nombre de repeticions i a continuació pressionar «ENTER».
Introduir en la cambra la cubeta del blanc i púlsar el boto «seleccionar blanc».
Introduir 4 pel numero de patrons per la corba, utilitzant el teclat numèric i pressionar «ENTER».
Establir les unitats de concentració, seleccionar «mg/ml» i pressionar «ENTER».
Introduir 1 (nombre de rèpliques que s’han llegit), seleccionar «NO» i pressionar «ENTER».
Introduir la concentració del primer patró utilitzant el teclat numèric «PATRÓ (1) 0,125» i pressionar «ENTER».
Llegir el valor de l’absorbància pel patró 1, col·locar la cubeta a la cambra i pressionar “LLEGIR LA MOSTRA».
Repetir aquest procediment per a tots els patrons.
La pantalla ens diu «DESITGA MODIFICAR LA CORBA ESTÀNDARD? », seleccionar «NO» i pressionar «ENTER».
Desar la corba estàndard i proporcionar un nom a la corba.
Seleccionar per no llegir rèplica «NO» i pressionar «ENTER».
Sortir de l’assaig prement la tecla ◄ i ens apareix a la pantalla «IMPRIMIR TOT EL RESULTAT? » seleccionar «SI» i pressionar «ENTER».

Pressionar el botó «PROTEÏNA».
Seleccionar assaig Bradford. A la pantalla apareix «RESTAR LECTURA DE FONS?» seleccionar «NO».
A la pantalla apareix «TRAÇAR LA NOVA CORBA?» seleccionar «NO".
Desprès enes diu «RECUPERAR CORBA?» seleccionar «SI». Escollim la corba guardada.
A la pantalla apareix «INFORME DE LA CORBA?» seleccionar «NO».
Situar la cubeta del blanc i prémer «LLEGIR BLANC».
Desprès cal situar la mostra 1 a la cubeta i pressionar «LLEGIR MOSTRA » i així fins acabar amb totes les mostres.