Determinació de les proteïnes.1

OBJECTIUS

• Determinar la existència o absència de proteïnes en les mostres.
• Ordenar segons la coloració creixent dels resultats de les reaccions amb els reactius que està relacionada amb la quantitat de proteïnes.
• Determinar les proporcions reals de proteïnes a cada mostra.

FONAMENT TEÒRIC

• Proteïnes: són biomolècules formades per un conjunt superior a 100 aminoàcids units per un enllaç peptídic.
• Aminoàcids: són les unitats bàsiques per estructurar proteïnes formades per un amino(-NH2), un carboxil (-COOH), un carboni principal (Cα) i un radical (R).
• Enllaç peptídic: és un enllaç covalent que està localitzat entre entre el grup carboxil i el grup amino que desprenen una molècula d'aigua.
  • 40% del temps consisteix un enllaç doble (dipèptic)
  • 60% del temps consisteix un enllaç simple (pèptic)
• Prova del biuret: és basa en la reacció entre els enllaços peptídics i els àtoms de coure que es torna en un complex de color violeta-rosaci.
• Prova de les xantoproteïca: és basa en la reacció entre els aminoàcids aromàtics, que acostumen a presentar les proteïnes, i l'àcid nítric que formen compostos nitrogenats grocs.
• Desnaturalització: és el trencament de l'estructura d'una proteïna per trencament dels ponts que formen aquesta estructura perden així la seva funció. La causa és de canvi del pH o temperatura.
• Espectrofotometria és un aparell que mesura l'absorbància i concentració d'un colorant que s'intercala entre els aminoàcids. Això és basa en la llei de Lambert-Beer com més proteïnes més coloració i per tant més absorbància.
• Mètode Bradford és una prova que detecta la presencia de monosacàrids. Es basa en la reducció del coure II al oxid de coure I, que és generada per la unió del colorant Comassie Blue G-250 amb les proteïnes, formant un complex vermell totxana.

MATERIAL I EQUIPAMENT

	Reactius	Equipament
Determinació qualitativa	Àcid nítric concentrar. Hidròxid de sòdic. Sulfat de coure. Albúmina d'ou. Clara d'ou, llet de soja i llet de vaca.	Tubs d'assaig i gradeta. Placa escalfadora. Vas de precipitats.
Determinació quantitativa	Colorant Comassie Blue G-250 Mostres (llet d'ovella, llet de soja i clara d'ou) PBS (solució salina tamponada de fosfor) BSA (sèrum albúmina bovina)	Espectrofotòmetre Micro-pipetejadors de capacitat 20 i 1000µL amb les seves micro-puntes corresponen Quatre matrassos aforats de capacitat de 25mL amb els seus taps corresponents. Para-film Entre 8 i 9 cubetes. Naveta Pipeta graduada i pipum Eppendorf

RISC PREVISIBLES

• Risc de cremada física per la placa calefactora.
• Risc de tall per material de vidre

HNO3	Provoca cremades greus cutànies i lesions oculars greus. Agreuja un incendi (comburent).
NaOH	Pot ser corrosiu pels metalls. Provoca cremades cutànies greus i lesions ocular greus.
CuSO4	Nociu en cas d'ingestió. Provoca irritació cutània. Provoca irritació ocular greu. Molt tòxic pels organismes aquàtics, amb efecte nociu duraré.
HCl	Provoca cremades cutànies greus i lesions oculars greus
Colorant Comassie Blue G-250	Provoca tos, dolor al pit i irritació al ser inhalat. Provoca irritacions, envermelliment i dolor ocular cutània. Provoca nàusees, vòmits diarrea i irritacions gastrointestinals al ser ingerit.