dilluns, 6 de març del 2017

Determinació de proteïnes.2

Procediment

Preparació dels reactius

  • Dissolució de NaOH al 40%: Mesurem amb un bas de precipitats 50g de 1 M i els dissolem a 125mL H2O desionitzada.
  • Dissolució H2NO4: introduir en un petit bas de precipitats 20mL H2NO4.
  • Dissolució de Cu2SO3 1%: mesurar amb una naveta 0,25 g de Cu2SO3, introduir en un erlenmeyer i pipetejar 25mL de aigua desionitzada.
  • Dissolució HCl 20%: mesurar 6,4mL amb una pipeta graduada i abocar a un erlenmeyer, pipetejar 25,6mL d'aigua desionitzada.
  • Abocar en un bas de precipitats uns 50mL d'aigua i introduir NaCl fins a la saturació de la dissolució.

Dissolució de les mostres

  • Etiqueta el bas de precipitat amb el nom de la mostra o blanc
  • Pipetejar 2mL de la mostra/blanc i abocar en el bas.
  • Mesurar 98mL d'aigua desionitzada en una proveta i abocar en el bas de precipitat.
  • Remenar amb una vareta de vidre.

Execució de les proves

Reacció xantoproteïca
  • S'etiqueten quatre tubs d'assaig «X. Nom de la mostra» o «X.B»
  • Es pipeteja 2 ml de la mostra/blanc i els avoquem en el seu tub d'assaig corresponent.
  • S'afegeix 1mL d'àcid nítric amb una pipeta de vidre.
  • A continuació s'escalfa aigua (pot ser de l'aixeta) una placa calefactora (per accelerar el procés és pot col·locar un vidre de rellotge en la boca del bas).
  • Quan l'aigua ja està bullint s'introdueix els tubs d'assaig al bas de precipitats amb aigua calenta (la placa ha d'estar apagada) durant uns 30'.
  • S'extreuen els tubs d'assaig i els col·loquem amb un altre bas amb aigua freda per refredar.
  • Quan ja estiguin els tubs a temperatura ambiental afegir 1mL de NaOH a la mostra/blanc.
  • Anotar i ordenar els resultats obtinguts a partir de més taronjós a menys.
Prova del biuret
  • S'etiqueten quatre tubs d'assaig «B. Nom de la mostra» o «B.B»
  • Es pipeteja 2mL de la mostra/blanc al tub d'assaig i els avoquem en el seu tub d'assaig corresponent.
  • Es pipeteja 5mL de NaOH i s'aboca en el tub.
  • A continuació s'introdueix un parell de gotes (fins notar una coloració nítida) de Cu2SO3
  • Anotar i ordenar els resultats obtinguts a partir de més lila a blau.
Desnaturalització
  • Marcar 12 tubs d'assaig amb números.
  • Pipetejar 2mL de la mostra i abocar en 4 tubs d'assaig per mostra.
  • Pipetejar 2mL de NaOH i abocar en els tubs d'assaig 1, 5 i 9.
  • Pipetejar 2mL de HCl i abocar en els tubs d'assaig 2, 6 i 10.
  • Pipetejar 2mL de NaCl i abocar en els tubs d'assaig 3, 7 i 11.
  • Escalfeu moderadament sense introduir re els tubs d'assaig 4,8 i 12
  • Anoteu els resultats i ordenar per ordre de coagulació de proteïnes.

Càlculs

Càlculs de les dissolucions dels reactius

NaOH 40%
Cu2(SO4)3
H2NO3
HCl
NaCl

Dades

Enregistrament de les dades


Reacció xantoproteïca
Prova biuret
Llet de vaca
+
+
Clara d'ou
+
+
Llet de soja
+
+
Blanc
-
-

Observacions:


Els resultats obtinguts en les mostres presenten graus: 1r Clara d'ou, 2n Llet de soja i 3r llet de vaca.