Preparació de medis de cultiu

1. Coneixement/calcular el volum del medi (aigua destil·lada) a elaborar (15 mL/ tub o placa).
2. Calcular la quantitat en massa de medis en pols.
3. Agitar amb calefacció la dissolució. Mosca + mescla (H2O+PCA) fins que inici el bull.
4. Dosificar 15 mL de PCA en el tub d'assaig (tancar completament els tubs d'assaig menys una volta).
5. L'autoclau ha d'estar a 121ºC, 1 atm durant 15-20'.
6. Fer un bany termostàtic d'aproximadament 50ºC (els tubs d'assaig han d'estar completament tancats).
7. En Sland tots els tubs d'assaig han d'estar inclinats a refredar. I les altres abocar-les en les plaques per a refredar.

Tinció simple

Objectiu: observar l'estructura morfologica de la cèl·lula epitermis bocal, provinent de la cara interna de la galta.

Material: blau metilè, paper de cèl·lulosa, bec bunsen, cobraobjectes, safata, vas de presepitats, pipeta Pauster, portaobjectes, microscopi, dues varetes, aigua destil·lada i escuradents

Procediment:

Es cobreix amb paper de cel·lulosa la cobeta i amb dues baretes subjectes el portaobjectes.

Posar una gota d'aigua al portaobjectes.

Introduir un escuradents a l'interior de la boca i raspar la cara interna de la galta i extendrel per tot el portaobjectes.

Fixar-lo amb el Bec Bunsen eliminant tota l'aigua.

Afegeix unes gotes de blau metilè durant 2 a 3 minuts (escampal inclinant-lo).

El rentes amb aigua destil·lada utilitzant la pipeta Pauster, evitant que toqui el tint.

Esperes que se sequi a l'aire i desprès amb paper el voltant.

Observació:

Augment x4: s'observa el citoplasma de cèl·lules secretores formant glandules i bastonets desconeguts.

Augment x10: s'observa el citoplasma de cèl·lules secretores formant glandules i altres organuls desconeguts amb morfologia coccus.

Augment x40: s'observa el citoplasma i el nucli de cèl·lules secretores formant glandules i altres organuls desconeguts amb morfologia coccus.

Augment x100: s'observa el citoplasma i el nucli de cèl·lules secretores formant glandules, Streptococcus i altres organuls desconeguts.

Aclaracions:

S'utilitze el blau metilè com a colorant perquè augmenta el contrast de la morfologia de la cèl·lula, un altre colorants que es podria utilitzar és el metilè acetic.

S'ha realitxat un frotis on hem utilitzat un Bec Bunsen per fixar els possible bacteris, desnaturalitzes les proteïnes, per tant, mates els bacteris perquè no es reprodueixin, ni es moguin.

 

Tinció Vital

Objectiu: observar la morfologia de la cèl·lula epidermis vegetal provinent d'una ceba.

Material: blau metilè, pinces, ceba, ganivet, paper de cel·lulosa, safata, vas de precipitats, pipeta Pasteur, portaobjectes, microscopi, dues varetes, aigua destil·lada.

Procediment:

• Es cobreix amb paper de cel·lulosa la cubeta i amb dues varetes se subjecta el portaobjectes.
• S'agafa el teixit de la ceba amb pinces (el teixit ha de ser intern), ha d'estar ben estes al portaobjectes, sense cap arruga.
• Afegí una gota de blau metilè durant 2 a 3 minuts (escampa'l inclinant-lo).
• Rentar amb aigua destil·lada utilitzant la pipeta Pasteur sense tacar-la.
• Esperar que és sequi a l'aire i després amb paper és seca al voltant.

Observació:

• Augment x4, x10 i x40: es pot veure el citoplasma, la membrana cel·lular i el nucli.
• Augment x100: es pot veure el citoplasma, la membrana cel·lular, el nucli i el citosquelet.

Aclariments:

• S'utilitze el blau metilè com a colorant perquè augmenta el contrast de la morfologia de la cèl·lula, un altre colorants que es podria utilitzar és el cristall violeta.
• S'ha realitzat una extensió i no una fixació perquè s'hauria desnaturalitzat, per tant, la seva estructura hauria sofrit lleugeres distorsions a l'aparença original de la cèl·lula.