dissabte, 8 d’abril del 2017

Mesura de volums

FONAMENTS TEÒRICS
L’objectiu és aprendre a utilitzar els estris de mesura de material volumètric més emprats al laboratori:proveta, pipeta, matràs aforat i bureta.
Quan es treballa amb líquids, en lloc de mesurar masses normalment és més còmode mesurar volums.
Per tal que un recipient sigui apte per mesurar volums, és necessari que prèviament hagi estat aforat, és a dir que s’hagi determinat fins a quin punt cal omplir-lo per tal que mesuri el volum que se li ha assignat. Alguns permeten mesurar diferents volums, i per tant porten una escala graduada.
Enrasar és l’operació de fer que un líquid tingui el nivell indicat per la línia marcada. Per enrasar amb la majoria de líquids el menisc és còncau, i altres com el Hg el menisc és convex.
Tot el material volumètric el podem classificar en classe A i classe B segons el límit d’error. Els recipients més emprats per a la mesura de volums són: la proveta, pipeta, matràs aforat i bureta. Les pipetes poden ser d’un o de doble enràs, i també poden ser aforades o graduades.

MATERIAL I REACTIUS
Proveta, pipeta, matràs aforat i bureta

RISCOS PREVISIBLES
Risc de tallades per material en mal estat

PROCEDIMENT
1. Ús de la proveta.
  • Mira quins tipus de provetes tenim al laboratori (capacitats)
  • Mesura 30 ml. d’aigua. Amb quina proveta? 
100±0,75 classe B 
No hi han provetes de 30 mL
  • Mesura 200 ml. Amb quina?

250±2 mL classe B
No hi han provetes de 200 mL

2. Ús del matràs aforat:
  • Mira quins tipus de matràs tenim al laboratori (capacitats). Són de la classe A o B?
  • Mesura 50 ml. d’aigua. Amb quin matràs?
50±0,06mL classe A
  •  Mesura 200 ml. Amb quin?
250±0,3 mL classe B
No hi han matràs aforat de 200 mL

3. Ús de la bureta :
  • Mira quins tipus de buretes (capacitats) tenim al laboratori. Són de la classe A o B?
  • Mesura 20 ml. d’aigua. Amb quina bureta?
25±0,05 mL classe A
No hi han buretes de 20 mL
  • Mesura 10 ml. Amb quina?
10±0,02mL classe A

4. Ús de la pipeta :
  • Mira quins tipus de pipetes (capacitats) tenim al laboratori. Són de la classe A o B?
  • Mesura 10 ml. d’aigua. Amb quina pipeta?
10±0,04mL classe B (Pipeta aforada de doble enras)
  • Mesura 8,5 ml. Amb quina?
10±0,05 mL classe B (Pipeta graduada)

QÜESTIONS
1. Vols mesurar exactament 10ml. Amb què ho faràs?
Abocament: pipeta de doble enras aforada
Contingut: Matras aforat

2. Vols mesurar aproximadament 10 ml. Amb què ho faràs?
Abocament: pipeta graduada
Contingut: Proveta

3. Vols mesurar exactament 50 ml. Amb què ho faràs?
Abocament: pipeta de doble enras aforada
Contingut :Matras aforat

4. Vols mesurar exactament 100 ml, amb què ho faràs?
Abocament: pipeta de doble enras aforada
Contingut: Matras aforat

5. Vols mesurar aproximadament 100 ml, amb què ho faràs?
Abocament: pipeta graduada
Contingut: proveta

6. Vols mesurar exactament 50 ml. Amb què ho faràs?
Abocament: pipeta de doble enras aforada
Contingut: Matras aforat

7. Vols mesurar exactament 7,5 ml. Amb què ho faràs?
Abocament: pipeta graduada

8. Per mesurar 5ml aproximadament, què és millor emprar una proveta de 10ml o una de 50
ml?
Si tenen el mateix limit de tolerancia i classe, és millor emprar una proveta de 10mL perquè és innecessari utilitzar una de 50mL quan solament necessitem 5mL i generaria més error.

9. Busca l’error de cada material volumètric, i ordena l’exactitud de la mesura de 25ml amb:
pipeta (aforada), bureta, proveta o matràs aforat
Pipeta aforada 50±0,05mL classe AS, bureta 50±0,05mL classe A, matràs aforat 50±0,06mL classe A, proveta 50±0,5mL classe A.
Com no hi ha matràs aforat de 25mL al laboratori la comparativa es realitza a partir d'una capacitat de 50mL.

10. Per què no es pot escalfar el material volumètric?
No es pot escalfar el material volumètric perquè en calent al estar dilatat causaria un augment en el volum que pot cabre, per lo tant, mediries un sert volum però realment mesuraries més. A més el material volumètric està calibrat a 20ºC.

11. Per què un cop mesurat el líquid d’una pipeta no hem de bufar per tal que caigui la gota adherida en l’orifici de sortida?
Un cop mesurat el líquid d’una pipeta no hem de bufar per tal que caigui la gota adherida en l’orifici
de sortida perquè la gota ja està contada.

12. A cops a l’omplir un recipient, es formen bombolles en el seu interior. Com es poden eliminar? Hi ha dues formes d'eliminar les bombolles:
  • Donar petits copets.
  • Tapar l'orifisi, col·locar el recipent boc per ball i tornar a col·locar en l'estat inicial.

13. Què vol dir “acondicionar” el material volumètric? Per què es fa?
Acondicionar vol dir impregnar les parets del material volumètric amb la substacia a utilitzar. Això és fa per assegurar que dintre de lo que tenim al material no hi hagui una altre substància que es pugui mescla.

14. Per què es fa servir bàsicament un matràs aforat? Aquest ha d’estar sempre sec per dintre?
És fa servir per fer dissolucions. No és necessari sempre que lo que hi ha dintre és aigua desionitzada, perquè és realitza una dissolució.

15. Per què per enrasar ho haig de fer quan el líquid o la dissolució està a temperatura ambient?
Perquè el material volumetric està calibrat a temperatura ambiental.

CONCLUSIÓ
Amb aquest assaig és treure que s'ha d'utilitzar un determinat material volumètric depenent de la quantitat que vols mesurar, si l'assaig és quantificatiu o qualitatiu, l'ús que li has d'aplicar i el manteniment que has de fer prèviament a manipular.
A més aquest assaig ens ha permès determinar quin tipus de material volumètric és cada aparell:
  • La proveta mesura volums aproximats per contingut.
  • El matràs aforat mesura volums exactes per contingut.
  • La bureta mesura volums exactes per abocament però no és tan precís com la pipeta.
  • Pipeta aforada mesura volums exactes, com més enràs (un o dos) més exacta és, per abocament.
  • Pipeta graduada mesura volums exactes, decimals, per abocament.

dilluns, 6 de març del 2017

Determinació de proteïnes.2

Procediment

Preparació dels reactius

  • Dissolució de NaOH al 40%: Mesurem amb un bas de precipitats 50g de 1 M i els dissolem a 125mL H2O desionitzada.
  • Dissolució H2NO4: introduir en un petit bas de precipitats 20mL H2NO4.
  • Dissolució de Cu2SO3 1%: mesurar amb una naveta 0,25 g de Cu2SO3, introduir en un erlenmeyer i pipetejar 25mL de aigua desionitzada.
  • Dissolució HCl 20%: mesurar 6,4mL amb una pipeta graduada i abocar a un erlenmeyer, pipetejar 25,6mL d'aigua desionitzada.
  • Abocar en un bas de precipitats uns 50mL d'aigua i introduir NaCl fins a la saturació de la dissolució.

Dissolució de les mostres

  • Etiqueta el bas de precipitat amb el nom de la mostra o blanc
  • Pipetejar 2mL de la mostra/blanc i abocar en el bas.
  • Mesurar 98mL d'aigua desionitzada en una proveta i abocar en el bas de precipitat.
  • Remenar amb una vareta de vidre.

Execució de les proves

Reacció xantoproteïca
  • S'etiqueten quatre tubs d'assaig «X. Nom de la mostra» o «X.B»
  • Es pipeteja 2 ml de la mostra/blanc i els avoquem en el seu tub d'assaig corresponent.
  • S'afegeix 1mL d'àcid nítric amb una pipeta de vidre.
  • A continuació s'escalfa aigua (pot ser de l'aixeta) una placa calefactora (per accelerar el procés és pot col·locar un vidre de rellotge en la boca del bas).
  • Quan l'aigua ja està bullint s'introdueix els tubs d'assaig al bas de precipitats amb aigua calenta (la placa ha d'estar apagada) durant uns 30'.
  • S'extreuen els tubs d'assaig i els col·loquem amb un altre bas amb aigua freda per refredar.
  • Quan ja estiguin els tubs a temperatura ambiental afegir 1mL de NaOH a la mostra/blanc.
  • Anotar i ordenar els resultats obtinguts a partir de més taronjós a menys.
Prova del biuret
  • S'etiqueten quatre tubs d'assaig «B. Nom de la mostra» o «B.B»
  • Es pipeteja 2mL de la mostra/blanc al tub d'assaig i els avoquem en el seu tub d'assaig corresponent.
  • Es pipeteja 5mL de NaOH i s'aboca en el tub.
  • A continuació s'introdueix un parell de gotes (fins notar una coloració nítida) de Cu2SO3
  • Anotar i ordenar els resultats obtinguts a partir de més lila a blau.
Desnaturalització
  • Marcar 12 tubs d'assaig amb números.
  • Pipetejar 2mL de la mostra i abocar en 4 tubs d'assaig per mostra.
  • Pipetejar 2mL de NaOH i abocar en els tubs d'assaig 1, 5 i 9.
  • Pipetejar 2mL de HCl i abocar en els tubs d'assaig 2, 6 i 10.
  • Pipetejar 2mL de NaCl i abocar en els tubs d'assaig 3, 7 i 11.
  • Escalfeu moderadament sense introduir re els tubs d'assaig 4,8 i 12
  • Anoteu els resultats i ordenar per ordre de coagulació de proteïnes.

Càlculs

Càlculs de les dissolucions dels reactius

NaOH 40%
Cu2(SO4)3
H2NO3
HCl
NaCl

Dades

Enregistrament de les dades


Reacció xantoproteïca
Prova biuret
Llet de vaca
+
+
Clara d'ou
+
+
Llet de soja
+
+
Blanc
-
-

Observacions:


Els resultats obtinguts en les mostres presenten graus: 1r Clara d'ou, 2n Llet de soja i 3r llet de vaca.

Determinació de les proteïnes.3

Determinació quantitativa de proteïnes

Procediment

Realització de patrons


Les mesures exactes estan en l'apartat «Càlculs per fer les dissolucions patró»

Dilució de mostra

  • S'etiqueten tres tubs d'assaig amb els noms de les mostres.
  • Es dissolen les mostres de llet a 1:50.
    • Es pipeteja 5 ml de PBS i s'aboca en cada un dels tubs d'assaig.
    • En cada tub de mostra de llet s'aboca 1mL de la mostra corresponent.
  • Es dissol la mostra de clara d'ou a 1:125.
    • Es pipeteja 12,5mL de PBS i s'aboca en el tub d'assaig.
    • Introduir la mostra en un Eppendorf.
    • Es pipeteja 100µL de la mostra i s'aboca en el tub d'assaig.

Preparació de dissolucions l'espectrofotòmetre

  • S'etiqueta les cubetes depenent del contingut que s'abocara (patró, PBS o mostra).
  • Es pipeteja 20 µL de la dissolució i s'aboca en la cubeta corresponent.
  • Es pipeteja 1mL de Bradford i s'aboca en la cubeta.
  • Tapa amb para-film les cubetes i deixar que s'incubi durant 10' a temperatura ambiental.

Funcionament d'espectrofotòmetre

  • Endollar a la corrent i encendre l'equip.
  • Púlsar el boto «PROTEÏNA»
  • Púlsar el boto «SELECT» per escollir el tipus d'assaig, seleccionar «BRADFORD» i pressionar «ENTER».
  • En la pantalla surt «VOLS EXTREURE LA LECTURA DE FONS? » polsar «NO» i pressionar «ENTER».
  • En la pantalla surt «VOLS FER UNA NOVA CORBA ESTÀNDARD? » polsar «SI» i pressionar «ENTER».
  • Selecciona 1 per-programar el mètode pel nombre de repeticions i a continuació pressionar «ENTER».
  • Introduir en la cambra la cubeta del blanc i púlsar el boto «seleccionar blanc».
  • Introduir 4 pel numero de patrons per la corba, utilitzant el teclat numèric i pressionar «ENTER».
  • Establir les unitats de concentració, seleccionar «mg/ml» i pressionar «ENTER».
  • Introduir 1 (nombre de rèpliques que s’han llegit), seleccionar «NO» i pressionar «ENTER».
  • Introduir la concentració del primer patró utilitzant el teclat numèric «PATRÓ (1) 0,125» i pressionar «ENTER».
  • Llegir el valor de l’absorbància pel patró 1, col·locar la cubeta a la cambra i pressionar “LLEGIR LA MOSTRA».
  • Repetir aquest procediment per a tots els patrons.
  • La pantalla ens diu «DESITGA MODIFICAR LA CORBA ESTÀNDARD? », seleccionar «NO» i pressionar «ENTER».
  • Desar la corba estàndard i proporcionar un nom a la corba.
  • Seleccionar per no llegir rèplica «NO» i pressionar «ENTER».
  • Sortir de l’assaig prement la tecla ◄ i ens apareix a la pantalla «IMPRIMIR TOT EL RESULTAT? » seleccionar «SI» i pressionar «ENTER».

Lectura de les mostres: primer el blanc i després les mostres

  • Pressionar el botó «PROTEÏNA».
  • Seleccionar assaig Bradford. A la pantalla apareix «RESTAR LECTURA DE FONS?» seleccionar «NO».
  • A la pantalla apareix «TRAÇAR LA NOVA CORBA?» seleccionar «NO".
  • Desprès enes diu «RECUPERAR CORBA?» seleccionar «SI». Escollim la corba guardada.
  • A la pantalla apareix «INFORME DE LA CORBA?» seleccionar «NO».
  • Situar la cubeta del blanc i prémer «LLEGIR BLANC».
  • Desprès cal situar la mostra 1 a la cubeta i pressionar «LLEGIR MOSTRA » i així fins acabar amb totes les mostres.

DADES

Dades de l'etiqueta de les mostres

Mostra
Concentració
Dissolució
Llet d'ovella
5,4g/100mL
1:50
Llet de soja
3,6g/100mL
1:50
Clara d'ou
110mg/mg→1,0357mg/mL
1:125

Dades obtingudes en l'espectrofotòmetre

Nom
Concentració (mg/mL)
Absorbància
Patrons
0,125
0,041
0,5
0,059
1
0,390
2
0,735
Llet d'ovella
1,5572
0,574
1,5511
0,571
1,5546
0,573
Llet de soja
0,7316
0,234
0,7395
0,238
0,7409
0,238
Clara d'ou
8,9201
3,602
8,8597
3,577
9,3791
3,791
8,2857
3,341




Diagrama d'absorbància-concentració del patró amb línia de tendència

CÀLCULS
Càlculs per fer les dissolucions patró













Càlculs estadístics











Càlculs de la concentració de proteïnes en la mostra a partir de la nova mitjana i la línia de tendència
Llet d'ovella
Llet de soja
Clara d'ou

Error relatiu respecte el valor de l'etiqueta i el valor experimental
Llet d'ovella
Llet de soja
Clara d'ou